Z-ARG-LEU-ARG-GLY-GLY-AMC CAS 167698-69-3

Его часто используют в качестве пептидного субстрата для SARS-CoV PLpro (протеазы, похожей на папайю, вызванной коронавирусом тяжелого острого респираторного синдрома). SARS-CoV — это коронавирус, а его PLpro — ключевой фермент в процессе репликации вируса, участвующий в процессинге вирусных полимерных белков. Поэтому он имеет важное прикладное значение для изучения механизма репликации SARS-CoV, скрининга противовирусных препаратов и разработки вакцин.

Он также может служить флуоресцентным зондом для биологических изображений и исследований локализации клеток. Благодаря наличию группы АМС (аминометилкумарин) этот пептид проявляет флуоресцентные свойства и может излучать флуоресценцию при возбуждении. Это позволяет маркировать определенные молекулы или структуры в клетках и тканях, тем самым выявляя динамические изменения биологических процессов.

Его также можно использовать для высокопроизводительного-скрининга ингибиторов и непрерывного анализа. В процессе разработки лекарств крайне важно найти соединения, которые могут эффективно ингибировать активность определенных ферментов или белков. В качестве пептидного субстрата для PLpro его можно использовать в сочетании с потенциальными ингибиторами для оценки их активности путем измерения изменений скорости гидролиза субстрата. Этот метод обладает преимуществами высокой производительности, высокой чувствительности и высокой специфичности, что может значительно ускорить процесс скрининга лекарств.

Кроме того, его также можно применять для иммунологических исследований. Пептидные вещества играют важную роль в иммунной системе и могут участвовать в иммунном ответе в качестве антигенов или антител. Специфическая последовательность и структура Z-ARG-LEU-ARG-GLY-AMC могут придавать ему иммуногенность или иммунореактивность, что делает его пригодным для приготовления антител, вакцин или иммунодиагностических реагентов.

PLpro отвечает за процессинг полипротеинов вируса и выход из иммунной системы хозяина и является ключевой мишенью для противовирусных препаратов. Z-LRGG-AMC, как специфичный для PLpro субстрат, имеет эффективность расщепления более чем в три раза выше, чем традиционные субстраты, такие как Z-Gly-Gly Arg AMC. При скрининге лекарств потенциальные противовирусные препараты можно быстро идентифицировать путем определения степени ингибирования соединений PLpro-расщепления Z-LRGG-AMC.

For example, a study used this substrate to screen candidate molecules with inhibition rate>90% из библиотеки, состоящей из 100 000 соединений, обеспечивающей ключевую поддержку для разработки противовирусных препаратов, таких как ремдесивир. Сравнивая эффективность разрезания различных штаммов вируса PLpro на Z-LRGG-AMC, можно выявить влияние вариации вируса на активность протеазы. Например, скорость сокращения SARS-CoV-2 PLpro на Z-LRGG-AMC в 1,5 раза выше, чем у SARS-CoV PLpro, что позволяет предположить, что он может иметь более сильную иммунорегуляторную способность хозяина.

IPaseT и другие DUB регулируют деградацию белка, расщепляя С-концевую последовательность убиквитина. Z-LRGG-AMC имитирует C-концевую структуру убиквитина со значением kcat/Km, равным 18 M ⁻¹ с ⁻¹, что делает его идеальным субстратом для изучения кинетики DUB. Например, в исследованиях рака взаимосвязь между дисбалансом белкового гомеостаза и прогрессированием опухоли можно оценить путем обнаружения активности расщепления DUB на Z-LRGG-AMC в опухолевых клетках.

В сочетании с технологией флуоресцентного резонансного переноса энергии (FRET) Z-LRGG-AMC можно использовать для отслеживания в реальном-времени процессов модификации внутриклеточного убиквитинирования. Например, в модели нейродегенеративного заболевания определение уровня убиквитинирования альфа-синуклеина выявляет связь между его агрегацией и дисфункцией протеасом.

В 384-луночном планшете Z-LRGG-AMC смешивали с тестируемым соединением, и ингибиторы ферментов быстро проверяли по изменениям сигнала флуоресценции. Этот метод имеет высокую производительность (может проверять тысячи соединений в день) и низкую стоимость (затраты на одну пору).<0.1 USD), and has become a standard process for drug development. By changing the substrate concentration, the Km (Michaelis constant) and Vmax (maximum reaction rate) of the enzyme on Z-LRGG-AMC were determined, providing a theoretical basis for inhibitor design. For example, a study used this substrate to determine a Km value of 12 μ M for PLpro, providing key data for optimizing inhibitor affinity.