Меллитин CAS 20449-79-0

Хабермант сообщил, что 1 мкмоль/л пептида пчелиного яда может предотвратить пролиферацию опухолевых клеток, но не ингибирует рост и скорость клонирования нормальных клеток.

Власак и др. использовали обратную транскрипцию мРНК-ДНК для создания библиотеки кДНК ядовитой железы пчелиной матки с использованием плазмиды pBR322. Они выделили кДНК мелиттина из этой библиотеки, используя общую мРНК ядовитой железы пчелиной матки в качестве зонда, а затем клонировали ее на плазмиду pUC18 для анализа последовательности ДНК. Предсказанная последовательность мелиттина по результатам анализа последовательности ДНК была идентична фактической измеренной.

Чжан Цинвэнь начал извлекать РНК из ядовитой железы пчелиной матки для трансляции в яйца совки хлопковой, успешно синтезируя промелитин и изучая извлеченные компоненты мРНК. Результаты показали, что мРНК мелиттина высокой чистоты можно получить путем удаления рРНК из общей РНК.

Арора сравнил способность нормальных клеток печени крыс к антигипоксическому повреждению с клетками рака печени крыс и подтвердил, что мелиттин-активированная фосфолипаза А2 (PLA2) может снизить устойчивость раковых клеток печени к гипоксии. Дунн и др. слили ген антитела SCFV, полученный из мышиных клеток против миеломы человека и специфических белков поверхности клеток лимфомы, с геном пептида пчелиного яда, чтобы создать ген антитоксина, который может убивать опухолевые клетки. Слитый ген был экспрессирован в E. coli, а уточненный антитоксин продемонстрировал свою эффективность в уничтожении опухолевых клеток in vitro. Киндас и др. извлекли общую мРНК из ядовитых желез девственной пчелиной матки и обнаружили, что мРНК мелиттина содержит примерно 400 пар оснований и короткий полиА-хвост. [9] Эксперименты Хааза показали, что мелиттин может активировать клеточные липазы, включая фосфолипазу C (PLC), фосфолипазу D (PLD), фосфолипазу A2 (PLA2) и триглицериды.

Ли Цзичжоу и др. синтезировали ген пептида пчелиного яда посредством обратной транскрипции кДНК мРНК, используя λ GT11, создали библиотеку кДНК пептида пчелиного яда и провели скрининг положительных клонов, экспрессирующих гемолитический пептид пчелиного яда, с использованием зондов антител. Бенашир и др. использовали кальцеин в качестве флуоресцентного маркера для систематического изучения утечки мембраны, вызванной мелиттином. Считается, что связь междуМеллитини везикул происходит очень быстро, причем под действием мелиттина некоторые везикулы высвобождают все свое содержимое, а другие остаются нетронутыми. Коэффициент высвобождения содержимого связан с молярным соотношением мелиттин/липиды. В частности, мелиттин может различать неповрежденные и уже экссудированные везикулы, и это указывает на то, что наличие отрицательных зарядов на поверхности фосфолипидного бислоя оказывает ингибирующее влияние на литическую способность мелиттина, которая пропорциональна плотности отрицательных зарядов.

Кубо и др. сравнили мелиттин с основными щелочными белками эозинофилов, используя пять методов цитотоксического анализа. Результаты подтвердили, что мелиттин может внедряться в клеточную мембрану клеток K562 и образовывать поры, вызывая приток Ca2+, увеличивая внутриклеточную концентрацию Ca2+ и лизис клеток. В течение 1 часа мелиттин оказывает убивающее действие на все экспериментальные лейкозные клетки. Шамшер и др. обнаружили, что мелиттин может активировать фосфолипазу D и впоследствии лизировать клетки моноцитарного лейкоза человека (U937).

Ван Гуаньлинь и др. экстрагировали тотальную РНК из ядовитых желез пчел и амплифицировали кДНК белка-предшественника мелиттина с помощью RT-PCR. Кроме того, они ввели сайты расщепления амина перед последовательностью мелиттина посредством целевого мутагенеза и сконструировали последовательность, родственную мелиттину - вектор экспрессии мутированного белка пептида пчелиного яда, слитый с частичной последовательностью галактозидазы, и результаты анализа последовательности показали, что они успешно внедрили целевой кодон и были связаны с - Частичная последовательность галактозидазы образует правильную рамку считывания и экспрессирует мутагенный белок в Escherichia coli.

Хуан Сюэцян и др. наблюдали проапоптотический эффект мелиттина на клетки лейкемии человека и обнаружили, что эффект мелиттина в дозе 5 мг/мл на клетки лейкемии в течение 4 часов отличался от эффекта в течение 4 часов. Типичные апоптотические характеристики наблюдались после 24 часов обработки мкг/мл пчелы. ядовитый пептид. Дальнейшие эксперименты показали, что индукция клеточного апоптоза существенно коррелирует со снижением экспрессии гена bcl-2. Ван Цюбо и др. путем искусственного синтеза синтезировали два олигонуклеотидных фрагмента АТ, содержащих специфические сайты расщепления, и сформировали целевой ген под действием фермента Кленова. Они использовали эндонуклеазы рестрикции Hind III и Xmn I для одновременного расщепления целевого гена и вектора экспрессии плазмиды Pmal-p2 и сконструировали их рекомбинант под действием лигазы Т4. Для идентификации дополнительных клонов и специфического фермента использовался дополнительный скрининг. анализ расщепления и секвенирования проводили для получения прокариотических экспрессирующих клонов рекомбинантного пептида пчелиного яда.

Лю Лин и др. провели исследование на трех клеточных линиях рака печени: SMMC-7721, BEL-7402 и Hep-3B, используя метод МТТ для изучения зависимости мелиттина от дозы при ингибировании опухолей. Результаты показали, что ингибирующее действие мелиттина на опухоли составляет от 8 до 64 мк. В дозе г/мл скорость ингибирования опухоли мелиттином возрастает линейно и проявляет значительные противоопухолевые эффекты in vitro. Основываясь на этом предположении, это может быть связано с самоагрегацией мелиттина в высоких концентрациях. В высоких концентрациях он в основном появляется в тетрамерном состоянии, которое более эффективно связывается с клеточной мембраной по сравнению с мономерами, образуя тем самым ионные каналы, изменяя проницаемость мембраны, растрескивая клеточную мембрану и проявляя сильный противоопухолевый эффект in vitro. .

Ли Бай, Чжан Чен и другие с помощью генно-инженерных исследований продемонстрировали, что мелиттин вызывает апоптоз опухолевых клеток. После трансфекции рекомбинантным аденовирусом, несущим ген мелиттина, в некоторых клетках рака печени наблюдались морфологические изменения, такие как апоптотическая морфология, уменьшение объема, округлость и агрегация краев хроматина под микроскопом с инвертированным фазовым контрастом. Рекомбинантный аденовирус, несущий ген мелиттина, может эффективно индуцировать апоптоз в клетках рака печени, при этом уровень апоптоза составляет около 20%, что выше, чем в контрольной группе без рекомбинантного аденовируса и нетрансфицированного рекомбинантного аденовируса. Это говорит о том, что индуцирование апоптоза опухолевых клеток также является одним из механизмов действия генной терапии мелиттином.

Чжао Яхуа и другие целенаправленно модифицировали первичную структурную последовательность аминокислот мелиттина и выраженнуюМеллитинген посредством экспериментов. Постарайтесь свести к минимуму взаимодействие между мелиттином и бактериальными мозговыми оболочками, в основном за счет проникновения в мембрану ковровым способом, вызывающего стерилизацию. При этом за счет изменения количества зарядов и конформации молекулы вероятность ее амфифильного взаимодействия с мембраной клеток крови значительно снижается, тем самым достигается цель ингибирования гемолиза. Гемолиз модифицированного пчелиного яда значительно снизился по сравнению с активностью гемолиза стандартного образца примерно в 14,3 раза.

11 августа 2009 года британская газета Daily Mail сообщила, что ученые Вашингтонского университета в США обнародовали результат исследования — с помощью нанотехнологий они разработали «нано-пчелу», которую можно увидеть только под микроскопом. «Маленькие пчелы» могут проникать в раковые клетки, выделять пептиды пчелиного яда и уничтожать раковые клетки одну за другой. У маленькой пчелы также есть внутри специальные позиционирующие вещества, которые могут направлять ее по пути и напрямую достигать пораженного участка. В ходе эксперимента «нано-пчела» снизила количество раковых клеток у мышей с раком молочной железы на 45%, а количество раковых клеток у мышей с раком кожи снизилось на 75%.