Sephadex G75это своего рода наполнитель гелевого фильтра с хорошей производительностью. Это готовится с помощью сшивания декстрана и эпихлоргидрина. Это гель в форме бусины с большим количеством гидроксильных групп, которые легко набухают в растворах воды и электролита. Максимальный предел исключения этого соединения составляет 80000, а удельная степень набухания зависит от количества сухой смолы и условий эксплуатации. Например, при определенных условиях степень отек сухой смолы может составлять 519 мл/g. Когда диапазон рабочих pH составляет 6,210 (5,210 для некоторых продуктов), соединение может оставаться стабильным. Рекомендуется хранить его при комнатной температуре, прохладно и вдали от света в диапазоне температур 430 градусов (или 425 градусов), чтобы поддерживать его производительность и стабильность. Это вещество особенно подходит для больших биомолекул с молекулярной массой более 80000. В основном используется для опреснения и замены буфера таких больших биомолекул. Через одну - операцию шага можно быстро опресдывать, удалять загрязняющие вещества и переносить молекулы в новое буферное решение. В дополнение к опреснению и замене буфера, Sephadex G-75 также подходит для процесса очистки больших биомолекул.
 |
 |
Sephadex G75является гелем Dextran, который в основном используется для технологии разделения и очистки в биохимии и молекулярной биологии. Основное использование этого вещества заключается в следующем:
В процессе опреснения он может эффективно удалять соли (обычно малые молекулы неорганические соли) из биологических молекулярных растворов. Преимущество этого вещества состоит в том, что его легко работать, быстро и может достичь эффективного опреснения, не изменяя активность биомолекул. Кроме того, благодаря своей превосходной химической стабильности и биосовместимости он подходит для опреснительной обработки различных биомолекул, включая белки, пептиды, нуклеиновые кислоты и т. Д. В практических применениях, гелевое ослабление, обычно сочетается с другими технологиями очищения, такими как обмен ион, аффинная хроматография и т. Д., Для достижения комплексной очистки и разделения биомалекул.
Это вещество имеет широкий спектр применений в замене буфера, особенно в областях биохимии и молекулярной биологии. Например, в процессе очистки белка иногда необходимо переносить белки из одной буферной системы в другую буферную систему, которая более подходит для их стабильности и активности. И это вещество может эффективно достичь этой цели; В процессе экстракции нуклеиновой кислоты также необходимо отделить нуклеиновую кислоту от раствора, содержащего примеси и соли, и перенести ее в новый буфер для последующих операций. Это также применимо к этому сценарию; Во время клеточной культуры иногда необходимо заменить культуральную среду или буфер для поддержания роста и активности клеток. Он может быть использован для удаления вредных веществ из старых культурных носителей или буферов и введения новых культурных носителей или буферов.
Молекулярное просеивание
В процессах исследования белков и приготовления, как правило, необходимо отделить целевые белки от сложных смесей. Он может отделять белки в зависимости от их размера, тем самым достигая очистки белка. Регулируя условия элюирования, такие как прочность иона и значение pH элюента, эффективность разделения белков может быть дополнительно оптимизирована. В дополнение к белкам и нуклеиновыми кислотами, его также можно использовать для разделения и очистки других биомолекул, таких как полисахариды, ферменты, антитела и т. Д. Скорость движения этих биомакромолекул в геле зависит от их размера и формы, чтобы достичь эффективного разделения. Хотя это вещество не используется непосредственно в качестве инструмента для определения молекулярной массы, оно может служить вспомогательным инструментом в определении молекулярной массы.
В процессе очистки белка обычно необходимо удалить примеси мелких молекул, такие как соли, метаболиты малых молекул, несвязанные лиганды и т. Д. Из раствора белка. Это вещество может эффективно удалить эти мелкие молекулы из растворов белков, тем самым улучшая чистоту белков. Его эффект молекулярного сита позволяет эффективно удалить эти малые молекулы, что приводит к более чистым нуклеиновыми кислотами. Ферментные препараты обычно содержат мелкие молекулярные примеси, такие как непрореагированные субстраты, ингибиторы, метаболиты и т. Д. Эти примеси могут влиять на активность и стабильность ферментов. Благодаря гелевой фильтрации материала эти мелкие молекулярные примеси могут быть эффективно удалены, а чистота препарата фермента может быть улучшена. В дополнение к белкам и нуклеиновыми кислотами,
Имитировать межклеточную трансдукцию сигнала
Межоклоточная трансдукция сигнала является основным регуляторным механизмом жизненных активностей, включающих сложные процессы, такие как распознавание клеток, преобразование сигнала и физиологический ответ. Традиционные исследования часто опираются на модели живых клеток, но существуют такие ограничения, как сложные сигнальные сети и множественные мешающие факторы.Sephadex G75это классическая гель -фильтрационная среда Dextran. Его пористая структура и эффект молекулярного сита обеспечивают уникальную физическую модель для моделирования межклеточной передачи сигнала.
Физическая модель для моделирования межклеточной передачи сигнала с использованием Sephadex G-75
Моделирование межклеточных разрывов
Зазорный соединение - это гидрофильный канал, образованный между соседними клетками через линкер, что позволяет свободно обменять мелкие молекулы с молекулярной массой<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
Образование градиента молекул сигнала: различные концентрации сигнальных молекул (такие как CAMP, CA ²+) загружаются в гелевую колонку. Разница в скорости диффузии малых молекул в гелевой пор может наблюдаться с помощью эффекта молекулярного сита, и можно моделировать передачу градиента химических сигналов между клетками.
Синергетическое моделирование ответа: две взаимодействующие молекулы (такие как лиганд и рецептор) загружаются на обоих концах гелевой колонны, а их кинетика связывания анализируется посредством разницы во времени элюирования для моделирования процесса молекулярного распознавания в связи между клетками.
Моделирование молекулярного контакта на поверхности мембраны
Связь между молекулами поверхности мембраны зависит от специфических взаимодействий поверхностных белков клеточной мембраны. Sephadex G-75 может имитировать этот процесс посредством функциональной модификации:
Эксперимент по связыванию лиганда рецептора: биотинилированные рецепторные белки (такие как EGFR) фиксируются на поверхности гелевых частиц, флуоресцентные меченные лиганды (такие как EGF) фиксируются через систему биотина Streptavidin, а интенсивность связывающего сигнала контролируется с помощью сцепления флуоресценции для количественного определения аффиненности лиганда рецептора.
Конкурентный анализ связывания: предварительно загрузите рецепторный комплекс лиганда в гелевой колонке, добавьте конкурентные ингибиторы различных концентраций (таких как антитела против EGFR), рассчитайте константу ингибирования (KI) посредством пикового сдвига элюирования, и моделировать эффект вмешательства лекарств на пути клеточных сигналов.
Моделирование передачи химического сигнала
Химическая передача сигнала зависит от диффузии химических сигнальных молекул (таких как гормоны и цитокины), секретируемой клетками через жидкости тела или внеклеточный матрикс в клетках -мишенях. Sephadex g - 75 может построить трехмерную диффузионную модель:
Моделирование паракринной системы: секреторные клетки (такие как макрофаги) и клетки -мишени (такие как Т -клетки), соответственно инкапсулируются в гелевых микросферах, а статус активации клеток -мишеней (таких как экспрессия CD69) наблюдается посредством культуры СО для имитации локального эффекта паракратных сигналов.
Эндокринная передача сигнала: флуоресцентные маркированные гормоны (такие как инсулин) загружаются в гелевую колонку, а их взаимодействие с полями геля анализируется во время элюирования, а половина - срок службы гормонов в кровообращении и распределении целевых органов прогнозируется путем объединения математических моделей.
Применение случая Sephadex G-75 в исследованиях передачи сигналов клеток
Исследование трансдукции сигнала эритроцитов и функции интегрина
Рецептор адгезии тромбоцитов IIB 3 является наиболее распространенным гликопротеином на поверхности мембраны тромбоцитов и имеет решающее значение для образования гемостаза и тромба. Изучите использование Sephadex G-75 для имитации взаимодействия между тромбоцитами и субэндотелиальным коллагеном:
Модель активации интегрина: очищенный интегрин IIB 3 был зафиксирован на поверхности гелевых частиц, а растворимый фибриноген (FG) добавляли в качестве лиганда. Кинетика связывания была обнаружена с помощью поверхностного плазмонного резонанса (SPR). Было обнаружено, что аффинность интегрина к FG после активации был значительно улучшен (KD был снижен от μ M до NM).
Скрининг антиплатегического лекарственного средства: комплекс интегрина FG предварительной нагрузки в гелевой колонке, добавьте антигрегатные препараты с различными концентрациями (такими как тирофибан), рассчитайте частоту ингибирования лекарств на активности интегрина путем смещения пика элюции, и обеспечивают высокую скрининговую платформу для развития новых антитерботисты.
Регуляция сигнальных путей, связанных с опухоли
Опухолевые клетки способствуют пролиферации и метастазированию посредством аномальной активации сигнальных путей, таких как MAPK и PI3K/AKT. Sephadex G-75 может быть использован для изоляции и очистки ключевых белков в сигнальных путях:
Исследование пути сигнала EGFR: белок EGFR очищали гель-фильтрацией Sephadex G-75, и его состояние фосфорилирования анализировали с помощью масс-спектрометрии. Было обнаружено, что уровень фосфорилирования участков Y1068 и Y1086 EGFR был значительно увеличен после стимуляции EGF, которая активировала сигналы ERK1/2 и AKT.
Анализ механизма лекарственной устойчивости: в препарате -, устойчивых к раковым клеткам желудка (SGC7901/VCR) белок UHRF1 был выделен и очищал с помощью сефадекса G-75, и было обнаружено, что его сверхэкспрессия может ингибировать активацию связанных с апоптозом, связанными с белками, связанными с каппаз-3), уменьшается химии-сенсация.
Передача сигналов иммунных клеток и полисахарида
Полисахариды красных водорослей (BFP) усиливают иммунный ответ путем активации NF - κ B и сигнальных путей MAPK в макрофагах. Исследование разделения и очистки BFP и его компонентов (F1, F2, F3) с использованием Sephadex G-75:
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>95% были получены с помощью гель-фильтрации Sephadex G-75 в сочетании с ионной обменной хроматографией DEAE 52, а их молекулярные массы составляли 120 кДа, 85 кДа, 60 кДа и 45 кДа соответственно.
Активация сигнального пути: в модели макрофагов RAW264.7 BFP и ее компоненты могут значительно индуцировать секрецию NO и TNF -, а его механизм включает NF {{2} κ B -ядерную транслокацию и фосфорилирование JNK, ERK и P38 MAPK. Очищенные компоненты, разделенные Sephadex g - 75, показали, что F1 обладал самым сильным эффектом активации на nf - κ B и пути MAPK (увеличение производства NO и в 2,5 раза и TNF - секреция в 3 раза).
горячая этикетка : Sephadex G75 CAS 37224-29-6, поставщики, производители, фабрика, оптовая, покупка, цена, объем, для продажи