Иптг порошокможет использоваться для местного анестетического действия, применяется в качестве распространяющего агента для облегчения боли в послеоперационных ранах и язвах. Молекулярные биологические реагенты, обычно используемые для скрининга синих и белых пятен и экспрессии белка, индуцированной IPTG, в бактериях. IPTG, полное название изопропил- - D-тиогалактозид, CAS 367-93-1, молекулярная формула C9H18O5S, молекулярная масса 384,37 Дальтон, относится к низкомолекулярным соединениям. Белый или почти белый порошок, плохо растворимый в воде, но лучше растворимый в органических растворителях. В молекулах есть ионные группы, поэтому они обладают определенной степенью проводимости в воде. Стабилен при комнатной температуре, но легко разлагается при высокой температуре или в условиях сильной кислоты и щелочи. Очевидный запах отсутствует, но во время использования может возникать легкий запах органических соединений. Это широко используемый индуктор, используемый для индукции экспрессии белка в бактериях. В медицинской диагностике IPTG может служить флуоресцентным зондом или хромогенным агентом для обнаружения определенных молекул или тканей в образцах. Комбинируясь с молекулами-мишенями, IPTG может генерировать флуоресцентные сигналы или изменения цвета, обеспечивая надежную поддержку диагностики заболеваний.
|
Морфологический |
Кристаллический порошок |
|
Цвет |
Белый |
|
Температура плавления |
105 градусов С |
|
Точка кипения |
350,9 градусов Цельсия (грубая оценка) |
|
Плотность |
1,3329 (грубая оценка) |
|
Условия хранения |
2-8 градусов С |
|
растворимость в спирте |
растворимый растворимый 40 частей растворителя |
|
Коэффициент кислотности (pKa) |
13,00 ± 0,70 (прогнозировано) |
|
Растворим в воде |
50мг/мл |
|
точка возгорания |
197,8 градусов |
|
Растворимость |
1.6g/l |
|
Плотность пара |
5,21 (по сравнению с воздухом) |
|
Показатель преломления |
1,5060 (оценка) |
|
|
|
иптг порошок,Физические параметры, Мп. : 114 ~ 121 градус C, Описание использования, Общие реагенты молекулярной биологии, обычно используемые в синем -белом скрининге и IPTG-индуцированной экспрессии белка в бактериях. , Характеристики упаковки , 1Г, 5Г, 25Г, 100Г, 1КГ , Условия хранения
2-8 градусов в охлажденном, защищенном от света месте , Описание опасности , Код опасности : Xi , Уровень риска : R36 / 37 / 38 , Уровень безопасности : S23-24 / 25-36.
IPTG обычно используется в экспериментах по клонированию, в которых необходимо индуцировать активность -галактозидазы. Его часто используют в сочетании с X-Gal или Bluo-Gal для сине--белого скрининга рекомбинантных бактериальных колоний, которые с помощью Chemicalbook можно индуцировать для экспрессии lac-оперона в E. coli. IPTG связывается с белком-репрессором lacI и меняет его конформацию, чтобы предотвратить ингибирование гена lacZ, кодируемого -галактозидазой.
IPTG, полное название изопропил- -D-тиогалактозид, представляет собой широко используемый индуктор, широко используемый для индукции и регуляции экспрессии белка. Благодаря своей уникальной структуре и функциям IPTG обычно получают с использованиемИптг порошокметоды синтеза в лаборатории.
Синтетический маршрут
1. Синтез гликозидов:
Первый синтез -D-тиогалактозида обычно синтезируют методом синтеза гликозидов путем конденсации галактозы с соответствующими основаниями (например, изопропилом). На этом этапе необходимо использовать защитные группы, чтобы избежать образования побочных-продуктов в последующих реакциях.
2. Реакция фосфорилирования:
На основе синтеза гликозидов фосфатные группы вводятся посредством реакции фосфорилирования с получением изопропильной группы- -D-тиогалактозид-5'-фосфатного эфира. Этот этап требует использования фосфатов и соответствующих ангидридов или кислот.
3. Группа снятия защиты:
Реакцией снятия защиты с группы защитная группа в гликозиде удаляется с получением целевого продукта изопропил- - D-тиогалактозида. Этот шаг требует использования раствора кислоты или щелочи для облегчения реакции.
Экспериментальные этапы:
Подготовьте реагенты и инструменты:
Подготовьте необходимые сахара, основания, защитные группы, фосфаты, ангидриды или кислоты, растворители и другие реагенты, а также необходимые экспериментальные инструменты, такие как мешалки, термометры, спектрофотометры и т. д.
Синтез гликозидов:
Нагрейте и перемешайте галактозу с соответствующими основаниями в растворителе, добавьте катализатор и промотируйте реакцию конденсации. Этот этап требует строгого контроля температуры и времени перемешивания, чтобы обеспечить плавное течение реакции.
Реакция фосфорилирования:
Синтезированные гликозиды нагревают и перемешивают с фосфатом, ангидридом или кислотой в растворителе и добавляют катализатор для ускорения реакции фосфорилирования. На этом этапе необходимо контролировать температуру и время перемешивания, уделяя при этом внимание полярности и дозировке растворителя, чтобы обеспечить протекание реакции и образование продукта.
Группа снятия защиты:
Удалите защитную группу из продукта фосфорилирования в растворе кислоты или щелочи, чтобы получить целевой продукт изопропил- - D-тиогалактозид. На этом этапе необходимо контролировать значение pH и температуру, обращая при этом внимание на полярность и дозировку растворителя, чтобы обеспечить протекание реакции и образование продукта.
Сепарация и очистка:
Целевой продукт выделяют из реакционной смеси с помощью колоночной хроматографии, перекристаллизации и других методов разделения и очистки. Этот этап требует внимания к условиям эксплуатации, таким как температура, дозировка растворителя, скорость потока и т. д., чтобы обеспечить чистоту и выход продукта.
Анализ и идентификация:
Структурную идентификацию целевого продукта проводят с помощью аналитических методов, таких как ядерный магнитный резонанс и масс-спектрометрия. Этот этап требует использования соответствующих инструментов, оборудования и технических средств для подтверждения структуры и чистоты продукта.
Иптг порошокполное название изопропил- - D-тиогалактозид — широко используемый индуктор, широко используемый для индукции и регуляции экспрессии белка.
1. Индукция экспрессии белка:
IPTG играет важную роль в индукции экспрессии белка. Это широко используемый индуктор, который может эффективно индуцировать экспрессию специфических генов в бактериях, тем самым получая желаемый целевой белок за короткий период времени. Механизм его действия заключается в связывании с геном lacI бактерий, ингибировании активности его транскрипционного регуляторного белка, тем самым открывая lac-оперон бактерий и инициируя экспрессию генов-мишеней. При использовании лактозных оперонов в качестве промоторов экспрессии белка необходимы индукторы, и ИПТГ может действовать как аналог лактозы, индуцируя экспрессию галактозидазы в Escherichia coli. Он не может быть использован клетками для достижения устойчивой экспрессии. IPTG связывается с лаком|продукты, вызывая конформационные изменения от lacO, тем самым активируя транскрипцию. Эта индуцибельная регуляция транскрипции стала широко используемым элементом при конструировании векторов системы экспрессии E. coli.
2. Регуляция экспрессии генов:
IPTG играет важную роль в регуляции экспрессии генов. Как важный экспериментальный реагент, он играет важную роль в регуляции экспрессии генов и экспериментах по сверхэкспрессии белков. Контролируя время добавления и концентрацию IPTG, можно добиться регулирования экспрессии целевого белка. Этот регуляторный эффект основан на связывании ИПТГ с лаком|продукты в оперонах лактозы, изменяя их конформацию, тем самым оставляя lacO и дополнительно активируя транскрипцию. Этот индуцируемый механизм регуляции транскрипции придает IPTG большое значение в таких областях исследований, как функции генов, взаимодействия белков и скрининг лекарств.
3. Кристаллизация белка:
В экспериментах по кристаллизации белков IPTG используется в качестве индуктора, способствующего кристаллизации белков. Механизм его действия заключается в изменении конформации белков путем связывания с гидрофобными участками белков, тем самым способствуя агрегации и кристаллизации между белковыми молекулами. Этот процесс агрегации и кристаллизации обратим, поэтому кристаллизацию белка можно вызвать добавлением IPTG или растворить кристаллы белка путем удаления IPTG.
В экспериментах по кристаллизации белка IPTG обычно добавляют к раствору белка в конечной концентрации 1 мМ. Эта низкая концентрация IPTG позволяет избежать чрезмерной индукции белков, тем самым достигая лучших эффектов кристаллизации. В то же время IPTG может также служить молекулярным шапероном, помогая правильному сворачиванию и агрегации белков, тем самым получая более однородные кристаллы белка.
Следует отметить, что ИПТГ не во всех случаях способствует кристаллизации белка. Некоторые белки не чувствительны к IPTG или из-за присущей им структуры и свойств не подходят для кристаллизации, для различных белков необходимы экспериментальная проверка и оптимизация для определения оптимальных условий и методов кристаллизации.
Побочные реакции
Цитотоксичность
Токсичность для прокариотических клеток
Хотя IPTG обычно используется для индукции экспрессии генов в прокариотических клетках, высокие концентрации IPTG могут оказывать токсическое воздействие на прокариотические клетки. Исследования показали, что слишком высокая концентрация ИПТГ может мешать нормальным метаболическим процессам внутри клеток. Например, он может влиять на энергетический метаболизм клеток, вмешиваться в такие пути, как гликолиз и цикл трикарбоновых кислот, что приводит к снижению внутриклеточной выработки АТФ и влияет на рост и пролиферацию клеток. Кроме того, высокие концентрации ИПТГ могут также нарушать целостность клеточной мембраны, повышать ее проницаемость, приводить к утечке внутриклеточных веществ и позволять вредным веществам из внеклеточной среды проникать в клетку, вызывая тем самым клеточную гибель. Эксперименты показали, что при культивировании Escherichia coli в среде, содержащей высокие концентрации ИПТГ, скорость роста бактерий значительно замедляется, а количество жизнеспособных бактерий постепенно снижается с увеличением времени культивирования. Это указывает на то, что высокие концентрации ИПТГ оказывают определенное ингибирующее и убивающее действие на Escherichia coli.
Токсичность для эукариотических клеток
Помимо прокариотических клеток, IPTG также может быть токсичным для эукариотических клеток. Между эукариотическими и прокариотическими клетками существуют определенные различия в структуре и функциях, но IPTG все же может влиять на нормальные физиологические функции эукариотических клеток различными путями. С одной стороны, IPTG может влиять на пути передачи сигнала внутри эукариотических клеток. Передача сигнала внутри клеток играет решающую регуляторную роль в таких процессах, как рост, дифференцировка и апоптоз. ИПТГ может изменять интенсивность и направление передачи сигнала путем взаимодействия с определенными сигнальными молекулами внутри клеток, тем самым влияя на нормальную физиологическую активность клеток.
Токсичность для эукариотических клеток
С другой стороны, IPTG может вызывать реакцию окислительного стресса в эукариотических клетках. Окислительный стресс означает дисбаланс между внутриклеточным окислением и антиоксидантной активностью, что приводит к увеличению выработки активных форм кислорода (АФК). Чрезмерное количество АФК может атаковать биомолекулы, такие как ДНК, белки и липиды внутри клетки, вызывая повреждение клеток и функциональные нарушения. Исследования показали, что при определенных условиях обработка эукариотических клеток IPTG значительно повышает внутриклеточные уровни АФК, что сопровождается снижением жизнеспособности клеток и увеличением скорости апоптоза. Это предполагает, что IPTG может вызывать реакцию окислительного стресса и оказывать токсичное воздействие на эукариотические клетки.
горячая этикетка : Порошок иптг cas 367-93-1, поставщики, производители, завод, опт, купить, цена, оптом, продажа