Порошок протеиназы К CAS 39450-01-6

Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. является одним из самых опытных производителей и поставщиков порошка протеиназы k cas 39450-01-6 в Китае. Добро пожаловать на оптовую продажу высококачественного порошка протеиназы k cas 39450-01-6, который продается на нашем заводе. Доступен хороший сервис и разумные цены.

Протеиназа К Порошокпредставляет собой высокоэффективную, не-специфическую сериновую протеазу, широко используемую в молекулярной биологии и биохимии, в основном для расщепления белков и удаления примесей белков из препаратов нуклеиновых кислот. Он получен из гриба Engyodontium album (ранее Tritirachium album) и сохраняет свою активность в широком диапазоне температур (20-60 градусов) и pH (4-12), даже при инкубации в растворе, содержащем SDS (0,5-1%) или мочевину (4M) в денатурирующих условиях.

Фермент эффективно расщепляет широкий спектр белков, включая РНКазу и ДНКазу, путем расщепления пептидных связей (предпочтительно гидролизуя карбоксильный конец алифатических/ароматических аминокислот) и поэтому используется для удаления нуклеазы при экстракции ДНК/РНК для обеспечения целостности нуклеиновой кислоты. Кроме того, его обычно используют при переваривании тканей (например, образцы, залитые в парафин), лизисе клеток и протеомных исследованиях.

Порошок протеиназы К обычно поставляется в лиофилизированной форме, которая очень стабильна (-20 градусов для длительного хранения) и перед использованием ее необходимо растворить в буфере (например, Трис-HCl, ЭДТА). Его активность зависит от Ca²⁺, но хелатирующие агенты, такие как ЭДТА, лишь частично ингибируют активность фермента. При обращении следует избегать саморазложения, рекомендуется термическая инактивация при температуре 65 градусов. Из-за его мощной способности к гидролизу белков требуется тщательная защита во избежание контакта с кожей или слизистыми оболочками.

Протеиназа К порошок, также известная как протеиназа K или EC 3.4.21.14, представляет собой сериновую протеазу, выделенную и очищенную из Tritirachium album Limber. С момента его первого выделения Вольфгангом Эбелингом и др. В 1974 г. протеиназа К получила широкое применение в биохимии, молекулярной биологии, медицине и промышленности благодаря своей высокой активности и широкой субстратной специфичности.

В процессе экстракции ДНК и РНК основной функцией протеиназы К является расщепление белков, связанных с нуклеиновыми кислотами, что позволяет ДНК или РНК освободиться в растворе для последующей экстракции и очистки. Благодаря своей стабильности и высокой активности в отношении денатурирующих агентов, таких как мочевина и ДСН, протеиназа К обычно используется для выделения плазмид или геномной ДНК и РНК.

протеиназа К может ингибировать активность РНКазы и защищать РНК от деградации.

1. Экстракция ДНК и РНК

 

Экстракция ДНК: протеаза К может гидролизовать гистоны, которые связываются с ДНК, позволяя ДНК диссоциировать в растворе. Впоследствии примеси удаляли различными методами, такими как экстракция фенола хлороформом, осаждение этанолом и т. д., и собирали очищенную ДНК.
Экстракция РНК. В процессе экстракции РНК ферменты РНК обычно присутствуют в окружающей среде, а сама система отбора проб также может содержать ферменты РНК, что делает РНК очень восприимчивой к деградации. Добавление небольшого количества

2. Технология гибридизации in situ.

 

В технологии гибридизации in situ протеиназа К обычно используется для предварительной гибридизационной обработки для переваривания белков, окружающих целевую ДНК, увеличения вероятности связывания зонда с целевой нуклеиновой кислотой и усиления сигнала гибридизации. Однако следует отметить, что когда концентрация протеиназы К слишком высока, время переваривания слишком велико или температура инкубации слишком высока, это может вызвать повреждение структуры клетки, что приведет к отслаиванию участков ткани и исчезновению ядер клеток, тем самым влияя на результаты гибридизации. Поэтому при практическом применении необходимо строго контролировать концентрацию и время обработки протеиназой К.

3. Инактивация и дезинфекция вирусов.

 

Протеаза К благодаря своей сильной протеолитической активности может использоваться для инактивации и дезинфекции вирусов. Исследования показали, что обработка чистой воды и бытовых сточных вод определенной концентрацией протеиназы К может эффективно инактивировать вирусы. Протеаза К, как дезинфицирующее средство, инактивирующее вирусы, может снизить потенциальный вред, причиняемый организму человека обычными окислительными химическими дезинфицирующими средствами, а ее производство и транспортировка безопасны без необратимого загрязнения окружающей среды.

4. Вестерн-блоттинг и импульсный электрофорез.

 

Протеаза К также широко использовалась при подготовке хромосомной ДНК для импульсного электрофореза, вестерн-блоттинга и других экспериментов. В экспериментах по вестерн-блоттингу протеиназу К можно использовать для удаления не-специфичных белков из образца, улучшая специфичность и чувствительность блота. В экспериментах по импульсному электрофорезу протеиназа К может разрушать белковые примеси в образцах ДНК и повышать эффективность электрофореза.

5. Обнаружение и идентификация белков

 

Протеиназа К порошоктакже может быть использован для обнаружения и идентификации определенных белков. Например, при изучении трансмиссивной губчатой ​​энцефалопатии (TSE) протеиназу К можно использовать для переваривания белков в образцах тканей головного мозга, а также для выявления присутствия прионных белков путем обнаружения устойчивости патогенных прионов к протеиназе К. Кроме того, протеиназу К можно использовать и для таких экспериментов, как определение локализации ферментов на клеточных мембранах и удаление катионных белков, связанных с эндотоксинами (таких как лизоцим и рибонуклеаза А).

1. Медицинская сфера

 

Клиническое применение: Протеаза К имеет определенную лекарственную ценность в медицине. Например, лечение расстройства пищеварения желудочной протеазой, лечение бронхита кислой протеазой, лечение васкулита эластазой и т. д. Кроме того, трипсин, химотрипсин и т. д. также широко применяются для очищения хирургических гнойных ран и лечения плевральных серозных спаек.
Обнаружение и диагностика вирусов. Протеаза К также имеет потенциальное применение для обнаружения и диагностики вирусов. Переваривая белки в образце вируса и обнажая нуклеиновую кислоту вируса, это обеспечивает удобство для последующего тестирования нуклеиновой кислоты.

2. Промышленный сектор

 

Кожевенная промышленность: Протеаза К используется в кожевенной промышленности для удаления волос и смягчающей обработки, что позволяет сэкономить время и улучшить условия гигиены труда.
Текстильная промышленность: Протеазу К можно использовать в текстильной промышленности, например, при рафинировании шелка.
Пищевая промышленность: Протеаза К может использоваться в пищевой промышленности для тендеризации мяса, осветления спирта и т. д.
Моющее средство: Стиральный порошок с добавлением ферментов — это новый продукт среди моющих средств. Стиральный порошок, содержащий щелочную протеазу, способен удалить пятна крови и белковую грязь с одежды. Но при его использовании будьте осторожны, не прикасайтесь к коже, чтобы не повредить белок на поверхности кожи и не вызвать аллергические реакции, такие как сыпь и экзема.

Структурные характеристики

 

Молекулярная масса протеиназы К составляет примерно 28900 дальтон (28,9 кДа), также в литературе имеются сообщения о 29,3 кДа. Его аминокислотная последовательность и трехмерная пространственная структура очень похожи на субтилизин семейства сериновых протеаз, но есть и некоторые уникальные особенности.

Структура дисульфидных связей: молекулы протеазы К содержат дисульфидные связи, которые повышают их стабильность и позволяют им сохранять активность в широком диапазоне pH и в условиях высоких температур.
Сайты связывания Са ² ⁺:Протеиназа К порошоксодержит два сайта связывания Са²⁺, которые хотя и находятся далеко от активного центра, но имеют решающее значение для поддержания каталитической активности фермента. Удаление Ca²⁺ приведет к потере протеазы К около 80% своей активности, а повторное введение Ca²⁺ может лишь частично восстановить ее активность.
Каталитическая триада: протеаза K имеет каталитическую триаду Asp-His69-Ser224, которая является ключевой структурой ее гидролитической активности.

Механизм действия

 

Протеаза K может преимущественно гидролизовать эфирные и пептидные связи, прилегающие к C-концу гидрофобных аминокислот, серо-содержащих аминокислот и ароматических аминокислот, гидролизуя белки до коротких пептидов. Механизм его действия в основном включает в себя следующие этапы:

Связывание фермента с субстратом: после смешивания протеазы К с субстратом субстрат связывается с активным центром фермента, образуя комплекс фермент-субстрат.
Каталитическая реакция: под действием активного центра пептидная связь субстрата гидролизуется с образованием продукта, отделяющегося от фермента.
Сильный деградационный эффект протеазы К делает ее ключевым реагентом в различных биохимических реакциях, особенно в процессах экстракции ДНК и РНК. Протеаза К может эффективно расщеплять белки, связанные с нуклеиновыми кислотами, высвобождать нуклеиновые кислоты и ингибировать активность нуклеаз, уменьшая деградацию нуклеиновых кислот во время экстракции.

Протеиназа К порошок, как высокоактивная и субстрат-специфичная сериновая протеаза, имеет широкий спектр применения в биохимии, молекулярной биологии, медицине и промышленности. Он может разрушать белки, которые связываются с нуклеиновыми кислотами и высвобождать нуклеиновые кислоты; Увеличить возможность связывания зондов с целевыми нуклеиновыми кислотами в технологии гибридизации in situ; Используется для инактивации и дезинфекции вирусов; Удаление белковых примесей в экспериментах по вестерн-блоттингу и импульсному электрофорезу; Имеет лекарственное значение в области медицины; Используется в таких отраслях промышленности, как обработка кожи, текстильная промышленность, пищевая промышленность и производство моющих средств. Однако при использовании протеиназы К следует уделять внимание способу ее хранения и условиям использования, чтобы обеспечить ее стабильность и активность.

Протеиназа K — это сериновая протеаза широкого-спектра действия, широко используемая в молекулярной биологии, биохимии и медицинских исследованиях благодаря своим уникальным ферментативным свойствам и стабильности. В виде лиофилизированного порошка порошок протеиназы К играет решающую роль в таких экспериментах, как экстракция нуклеиновых кислот, переваривание белков и гомогенизация тканей. Однако использование любого биологического реагента сопряжено с потенциальным риском, а его побочные реакции могут затронуть здоровье операторов и безопасность экспериментальной среды.

горячая этикетка : протеиназа к порошок cas 39450-01-6, поставщики, производители, завод, опт, купить, цена, оптом, продажа