Ретатрутид(связь:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) представляет собой химически синтезированный полипептидный агонист GLP-1R/GIPR/GCGR длительного действия, который предназначен для лечения диабета 2 типа у взрослых, контроля веса и неалкогольного жирового гепатоза/неалкогольного стеатогепатита. Показание этого продукта при диабете 2 типа у взрослых одобрено для клинического применения 29 августа 2023 года. Кроме того, на завершающей стадии рассмотрения находится заявка на клиническую регистрацию показаний к неалкогольной жировой дистрофии печени/неалкогольному стеатогепатиту. В мире разрабатываются восемь агонистов GLP-1R/GIPR/GCGR, из которых Ретатрутид Риты добился самых высоких результатов и в июне этого года запустил третью фазу клинических испытаний. В том же месяце Рита объявила, что на ежегодном собрании ADA были опубликованы данные второго этапа исследования ретатрутида, показывающие, что через 24 недели ретатрутид (1 мг, 4 мг, 8 мг или 12 мг) достиг основной конечной точки эффективности. оценка для участников с ожирением или избыточным весом без диабета со средней потерей веса 17,5%. Среди вторичных конечных точек средняя потеря веса составила 24,2% к концу 48 недель лечения. Мы также синтезировали пептид в лаборатории на основе опубликованного метода. Конкретный метод синтеза будет кратко описан, а конкретные шаги можно отправить нам по электронной почте.
Метод 1:
Подробные этапы синтеза ретарутида с использованием твердотельного синтеза в лаборатории следующие:
Подготовьте необходимые реагенты и инструменты: в том числе аминокислоты, дихлорметан, карбонат калия, этоксилированный силикагель, ацетонитрил, пиридин, N-метилморфолин, источник диизопропилэтилхлорида, трифторуксусную кислоту, ДИПЭА, Boc-защищенные аминокислоты и другие реагенты, а также магнитные мешалки. , ротационные испарители и другие приборы.
(1) Синтез Вос-защищенных аминокислот: растворите необходимые аминокислоты в дихлорметане, добавьте порошок карбоната калия, равномерно перемешайте, добавьте этоксилированный силикагель, продолжайте перемешивание, а затем добавьте пиридин и N-метилморфолин для получения Вос-защищенных аминокислот.
(2) Твердофазный синтез: смешайте ацетонитрил, источник диизопропилэтилхлорида и трифторуксусную кислоту, равномерно перемешайте, добавьте подготовленные Boc-защищенные аминокислоты и продолжайте перемешивание для получения продукта твердофазного синтеза.
(3) Группа снятия защиты: растворите продукт твердофазного синтеза в дихлорметане, добавьте трифторуксусную кислоту, равномерно перемешайте, а затем добавьте DIPEA. Продолжайте перемешивать до получения твердофазного синтеза со снятой защитой.
(4) Очистка: растворите твердофазный синтез, лишенный защиты, в воде, доведите pH примерно до 9.0 с помощью раствора гидроксида натрия, затем доведите pH примерно до 5.0 с помощью уксусной кислоты и, наконец, чистый продукт осаждают эфиром.
Метод 2:
Подробные этапы синтеза ретарутида с использованием жидкофазного синтеза в лаборатории следующие:
Подготовьте необходимые реагенты и инструменты: включая аргинин, глицин, уксусный ангидрид, триэтиламин, карбонат калия, дихлорметан, метанол, пиридин, N-метилморфолин, уксусный ангидрид, ацетат натрия и другие реагенты, а также такие инструменты, как мешалки, делительные воронки, вакуумные насосы, печи и хроматографические колонки.
(1) Растворите аргинин и глицин в соответствующем количестве дихлорметана, добавьте соответствующее количество уксусного ангидрида и триэтиламина и равномерно перемешайте мешалкой.
(2) Перенесите растворенную смесь в духовку и нагревайте ее при 80 градусах Цельсия в течение 1 часа для ацетилирования аминокислотных остатков.
(3) Нейтрализуйте прореагировавший раствор порошком карбоната калия, чтобы нейтрализовать уксусную кислоту в растворе и получить ацетат натрия, а затем экстрагируйте образовавшийся пептид дихлорметаном.
(4) Промойте раствор экстрагированного пептида метанолом и отфильтруйте с помощью вакуумного насоса, чтобы получить неочищенный пептид.
(5) Растворите неочищенный пептид в соответствующем количестве пиридина и N-метилморфолина, добавьте соответствующее количество уксусного ангидрида и ацетата натрия и равномерно перемешайте мешалкой.
(5) Отфильтровать прореагировавший раствор с помощью вакуумного насоса, промыть осадок на фильтре метанолом, а затем отфильтровать с помощью вакуумного насоса для получения конечного Рестарутида.
Способ 3:
Подробные этапы синтеза ретарутида химическими методами в лаборатории следующие:
Подготовьте необходимые реагенты и инструменты: включая аргинин, глицин, уксусный ангидрид, триэтиламин, карбонат калия, дихлорметан, метанол, пиридин, N-метилморфолин, уксусный ангидрид, ацетат натрия и другие реагенты, а также такие инструменты, как мешалки, делительные воронки, вакуумные насосы, печи и хроматографические колонки.
(1) Растворите аргинин и глицин в соответствующем количестве дихлорметана, добавьте соответствующее количество уксусного ангидрида и триэтиламина и равномерно перемешайте мешалкой.
(2) Перенесите растворенную смесь в духовку и нагревайте ее при 80 градусах Цельсия в течение 1 часа для ацетилирования аминокислотных остатков.
(3) Нейтрализуйте прореагировавший раствор порошком карбоната калия, чтобы нейтрализовать уксусную кислоту в растворе и получить ацетат натрия, а затем экстрагируйте образовавшийся пептид дихлорметаном.
(4) Промойте раствор экстрагированного пептида метанолом и отфильтруйте с помощью вакуумного насоса, чтобы получить неочищенный пептид.
(5) Растворите неочищенный пептид в соответствующем количестве пиридина и N-метилморфолина, добавьте соответствующее количество уксусного ангидрида и ацетата натрия и равномерно перемешайте мешалкой.
(6) Отфильтровать прореагировавший раствор с помощью вакуумного насоса, промыть осадок на фильтре метанолом, а затем отфильтровать с помощью вакуумного насоса для получения конечного рестарутида.
Для получения целевой молекулы требуется несколько реакций органического синтеза. Кроме того, в этом методе используется множество органических реагентов и сложные условия эксплуатации, поэтому химический синтез ротарутида в лаборатории обычно не подходит для крупномасштабного производства или промышленного применения. Для крупномасштабного производства или промышленного применения чаще всего используется метод получения ротарутида с помощью таких методов синтеза, как биосинтез или жидкофазный синтез, которые относительно невелики в лабораторных масштабах, относительно просты в эксплуатации и подходят для приготовления небольших количеств продуктов. . Ретарутид, полученный этими методами, аналогичен или аналогичен по структуре и биологической активности ретарутиду, синтезированному химическими методами, но имеет преимущества более высокого выхода и простоты получения. В то же время они обладают лучшим потенциалом для индустриализации и более широкими перспективами применения.
Метод 4:
Подробные этапы синтеза ретарутида с использованием биологических методов в лаборатории следующие:
Подготовка необходимых генов и реагентов: Получите плазмиды, содержащие ген ретатрутида, из библиотеки генов, трансформируйте плазмиды клетками-реципиентами (такими как Escherichia coli) и получите инженерные бактерии, содержащие ген ретатрутида.
(1) Культивирование инженерных бактерий: при соответствующих условиях температуры, pH и концентрации ионов используйте культуральную среду для культивирования инженерных бактерий, позволяющую им размножаться в больших количествах.
(2) Экстракция ретарутида: культивируемые инженерные бактерии измельчаются с помощью дробилки, а фрагменты клеток отделяются от ретарутида с использованием таких методов, как ультрафильтрация и седиментация, для получения неочищенного продукта.
(3) Очистка ретарутида: неочищенный ретарутид очищают с использованием технологии хроматографии для получения ретарутида высокой чистоты.
Обнаружение и идентификация ротарутида: используйте высокоэффективную жидкостную хроматографию, масс-спектрометрию, ядерный магнитный резонанс и другие методы для обнаружения и идентификации структуры очищенного ротарутида.
Уравнение химической реакции биологического синтеза ретарутида в лаборатории в основном включает химические реакции в процессе экспрессии генов, включающие два этапа: транскрипцию и трансляцию.
Транскрипция: двухцепочечная ДНК открывается, используя одну цепь в качестве матрицы для синтеза цепей РНК, что требует участия РНК-полимеразы. Уравнение реакции выглядит следующим образом:
Двухцепочечная ДНК: ДНКпол → мРНК+ДНКпол.
Перевод: Рибосомы связываются с мРНК для синтеза пептидных цепей — процесса, который требует участия аминокислот и энергии. Уравнение реакции выглядит следующим образом:
Рибосома+мРНК → Пептидная цепь+GDP+Pi+H2O
Пептидная цепь+АТФ → Пептидная цепь+АМФ+PPi
Среди них ДНКпол представляет собой ДНК-полимеразу; МРНК представляет собой информационную РНК; Рибосомы представляют собой рибосомы; Пептидные цепи представляют собой полипептидные цепи; ВВП представляет собой гуанозиндифосфат; Pi представляет собой неорганическую фосфорную кислоту; H2O представляет собой воду; АТФ представляет собой аденозинтрифосфат; AMP представляет собой аденозинмонофосфат; PPi представляет собой неорганический пирофосфат. В результате этих реакций образуются пептидные цепи, необходимые для синтеза ретарутида, которые затем обрабатываются и модифицируются на более поздних стадиях для получения ретарутида.
Выше приведены распространенные методы синтеза ротарутида в лаборатории, каждый из которых имеет свои преимущества, недостатки и сферы применения. В лаборатории обычно используются методы жидкофазного синтеза и твердофазного синтеза для мелкосерийного производства для исследовательских и экспериментальных целей; С другой стороны, промышленное производство предполагает сочетание биосинтеза и производства в жидкой/твердой фазе для крупномасштабного производства, отвечающего рыночному спросу. Следует отметить, что эти методы требуют строгой оптимизации условий и контроля процесса для обеспечения качества и чистоты конечного продукта.