ИПТГ, или изопропил β-D-1-тиогалактопиранозид, является хорошо известным реагентом в области молекулярной биологии. Какреагент ИПТГПоставщик, я своими глазами видел, как это маленькое химическое вещество может оказать большое влияние на исследования белков, особенно когда дело касается посттрансляционной модификации белков.
Реагент ИПТГ
Код продукта: BM-2-5-091
Английское название: ИПТГ
№ CAS: 367-93-1
ПФ: C9H18O5S
МВт: 238,3
ЭИНЭКС: 206-703-0
Производитель: Фабрика BLOOM TECH в Уси
Анализ: ВЭЖХ, ЖХ-МС, ЯМР.
Основной рынок: США, Австралия, Бразилия, Япония, Германия, Индонезия, Великобритания, Новая Зеландия, Канада и т. д.
Технологическая поддержка: Отдел исследований и разработок-4.
Мы предоставляемреагент ИПТГ, пожалуйста, посетите следующий веб-сайт для получения подробных технических характеристик и информации о продукте.
Продукт:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/api-researching-only/iptg-reagent-cas-367-93-1.html
Что такое посттрансляционная модификация?
Прежде чем мы углубимся в то, как IPTG влияет на посттрансляционную модификацию, давайте быстро рассмотрим, что такое посттрансляционная модификация. После того как белок синтезируется из мРНК в процессе, называемом трансляцией, он часто подвергается различным химическим модификациям. Эти модификации могут изменить структуру, функцию, стабильность и способность белка взаимодействовать с другими молекулами. Некоторые распространенные посттрансляционные модификации включают фосфорилирование, гликозилирование, ацетилирование и убиквитинирование.
Как IPTG работает в экспрессии белка
ИПТГ широко используется в качестве индуктора экспрессии рекомбинантных белков у бактерий, особенно у E. coli. В E. coli lac-оперон представляет собой набор генов, участвующих в метаболизме лактозы. В норме lac-оперон репрессируется, но когда к культуре добавляется IPTG, он связывается с lac-репрессорным белком, вызывая конформационные изменения. Это изменение высвобождает репрессор из операторной области lac-оперона, позволяя РНК-полимеразе связываться и транскрибировать последующие гены, включая ген, кодирующий интересующий нас рекомбинантный белок.
Влияние на посттрансляционную модификацию
фосфорилирование
Фосфорилирование — одна из важнейших посттрансляционных модификаций. Он может регулировать активность, локализацию и взаимодействие белков. Когда IPTG используется для индукции экспрессии белка, он может косвенно влиять на фосфорилирование. Например, сверхэкспрессия белка, индуцированная IPTG, может привести к дисбалансу в клеточной системе киназа-фосфатаза. Некоторые киназы могут быть перегружены большим количеством субстрата (вновь синтезированного белка), что приводит либо к недостаточному, либо к чрезмерному фосфорилированию.
Более того, повышенная метаболическая активность в клетке из-за сверхэкспрессии белка может изменить доступность АТФ, которая является донором фосфата для реакций фосфорилирования. Это может еще больше нарушить нормальные закономерности фосфорилирования экспрессируемого белка.
Гликозилирование
Гликозилирование – это присоединение углеводных групп к белкам. Бактерии, подобные E. coli, которые обычно используются для экспрессии белков с помощью IPTG, не имеют такого же механизма гликозилирования, как эукариотические клетки.
Однако присутствие IPTG-индуцированной экспрессии белка все же может иметь влияние. Повышенная потребность в клеточных ресурсах во время сверхэкспрессии белка может привести к нехватке нуклеотидных сахаров, которые являются строительными блоками гликозилирования. Это может привести к неполному или аномальному паттерну гликозилирования, если белок имеет потенциальные сайты гликозилирования.
Ацетилирование
Ацетилирование — еще одна важная посттрансляционная модификация, которая может влиять на стабильность и функцию белка. IPTG-индуцированная экспрессия белка может изменить внутриклеточную среду. Например, повышенное производство белков может изменить уровни ацетил-КоА, который является донором ацетила для реакций ацетилирования. Если уровни ацетил-КоА истощаются из-за высокого уровня экспрессии белка, это может привести к снижению ацетилирования экспрессируемого белка.
Тематические исследования
Давайте посмотрим на некоторые примеры из реальной жизни. В ходе исследования исследователи пытались экспрессировать рекомбинантный человеческий белок в E. coli с помощью IPTG. Они заметили, что этот белок имеет разные модели фосфорилирования по сравнению с нативным белком в клетках человека. Сверхэкспрессия, индуцированная IPTG, привела к аномальному состоянию фосфорилирования, что повлияло на активность белка.
Другой пример связан с гликозилированием. Когда гликопротеин экспрессировался в E. coli с помощью IPTG, отсутствие надлежащего механизма гликозилирования в E. coli в сочетании с ограничениями ресурсов, вызванными IPTG-индуцированной сверхэкспрессией, приводило к нефункциональному белку. Аномальный паттерн гликозилирования не позволял белку правильно сворачиваться и взаимодействовать с молекулами-мишенями.
Роль IPTG в исследованиях и промышленности
IPTG является ключевым инструментом как в исследованиях, так и в биотехнологической отрасли. В исследованиях это позволяет ученым изучать функции белков, контролируя их сверхэкспрессию. В биотехнологической промышленности его используют для крупномасштабного производства рекомбинантных белков в терапевтических и диагностических целях.
Однако необходимо тщательно учитывать влияние IPTG на посттрансляционную модификацию. Например, если белок предназначен для терапевтического использования, любые аномальные посттрансляционные модификации могут повлиять на его безопасность и эффективность. Поэтому исследователям и специалистам отрасли необходимо оптимизировать условия индукции IPTG, чтобы минимизировать эти эффекты.
Другие родственные реагенты
Как поставщик реагентов IPTG, я также хочу упомянуть некоторые другие реагенты, связанные с исследованиями белков. Возможно, вас заинтересуетПорошок гидрохлорида амитриптилина CAS 549 до 18 до 8, который используется в некоторых исследованиях, связанных с взаимодействием белка с малыми молекулами.Циленгитид– еще один интересный реагент, который можно использовать при изучении белок-клеточных взаимодействий. ИПротопорфирин IX CAS 553 - 12 - 8имеет применение во взаимодействиях белок-гем.
Заключение и призыв к действию
В заключение отметим, что ИПТГ является мощным реагентом, оказывающим значительное влияние на посттрансляционную модификацию белков. Хотя это ценный инструмент для экспрессии белков, нам необходимо осознавать его потенциальное влияние на посттрансляционную модификацию. Независимо от того, являетесь ли вы исследователем в лаборатории или профессионалом в биотехнологической отрасли, понимание этих эффектов имеет решающее значение для успешных исследований и производства белков.
Если вы заинтересованы в покупке высококачественного реагента IPTG или любого другого родственного реагента, о котором я упоминал, свяжитесь с нами. Мы здесь, чтобы предоставить вам лучшие продукты и поддержку для ваших потребностей в исследованиях белка.
Ссылки
Альбертс Б., Джонсон А., Льюис Дж., Рафф М., Робертс К. и Уолтер П. (2002). Молекулярная биология клетки. Гирляндная наука.
Сэмбрук Дж. и Рассел Д.В. (2001). Молекулярное клонирование: Лабораторное руководство. Лабораторный пресс Колд-Спринг-Харбор.